蜂蜜中寡糖的鉴定

蜂蜜中寡糖的鉴定

    蜂蜜的主要成分为果糖、葡萄糖和水。目前市场出现的假蜂蜜中常常添加大量糖浆，含有较多寡糖成分。通过检测蜂蜜样品中的是否出现寡糖，能快速、可靠地鉴别常规掺假蜂蜜。

一、实验目的

本实验以固相萃取法对市售蜂蜜进行样品前处理，联合薄层色谱，检测蜂蜜中的寡糖成分，以此鉴定蜂蜜是否掺假。该方法可准确鉴别常规掺假蜂蜜，简单可靠，并能减少有机溶剂的使用量。

二、实验目标物：寡糖。

三、适用范围：《中.华人民共和国药典2015版一部·蜂蜜》。

四、方法原理：试样中的高分子糖，经活性炭-硅藻土小柱的富集、浓缩，再用薄层色谱法分离、检测。经过与掺有一定含量的麦芽五糖的纯蜂蜜比较，来判定蜂蜜中寡糖的存在。

五、实验方法

1、样品处理：取样品 2g，置烧杯中，加入10mL水彻底溶解。

2、蜂蜜专用柱净化

（1）活化：25mL水，过柱速度1秒/滴（用超纯水活化小柱时，注意在液面下降至小柱填料上端时，可添加样品溶液上样，切记活化过程中不能将液面抽干，否则会影响小柱对寡糖的保留效果）

（2）上样：在50mL烧杯中称取2g样品溶于10mL水后，缓慢加入到蜂蜜专用柱上（需要用固相萃取装置，抽取一定的真空度以确保液体能够滴出小柱）

（3）淋洗：用7%乙醇25mL淋洗，不收集淋洗液

（4）洗脱：用50%乙醇10 mL洗脱，收集洗脱液

（5）浓缩：收集的洗脱液置于65 ℃水浴中减压浓缩至干（旋蒸浓缩的时候25mL鸡心瓶，防止损失样品；可以少量多次地添加溶剂进行复溶）

（6）复溶：残渣加30%乙醇1mL使之溶解，摇匀。溶解时候要注意确保残渣完全复溶

3、薄层色谱条件

薄层板：硅胶G 薄层板，110℃活化1小时

展开剂：正丙醇-水-三乙胺（60:30:0.7）

点样量：3uL

显色剂：苯胺-二苯胺-磷酸的混合溶液(取二苯胺1g，苯胺1mL，磷酸5mL，加丙醇至50mL，混匀）

显色方法：喷以显色剂，105 ℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品相应位置的下方，应不得显斑点。

六、实验结果与判断标准

从恒温干燥箱中取出薄层板，观察TLC板的显况，纯蜂蜜只在Rf值0.35以上的区域有2~3个蓝色中带灰色或咖啡色的斑点，相比较麦芽五糖或混有麦芽五糖的蜂蜜却是从原点开始呈现蓝色带状样的斑点群。